El municipio de Guadalupe se localiza en la zona centro del estado y forma parte del Área Metropolitana de Monterrey. Su ecosistema corresponde principalmente al matorral xerófilo y submontano, característico del noreste mexicano, aunque gran parte del territorio se encuentra urbanizado. El relieve del municipio combina zonas planas con áreas de lomeríos y partes montañosas asociadas a la Sierra Madre Oriental, especialmente hacia el sur, donde destacan elevaciones como el Cerro de la Silla. El clima es semiseco cálido, con veranos muy calurosos, lluvias concentradas principalmente en verano e inviernos templados. Entre la flora más representativa se encuentran mezquites, huizaches, anacahuitas, nopales y lechuguillas.

A pesar del crecimiento urbano, Guadalupe aún conserva fauna típica de la región, como tlacuaches, conejos, liebres, coyotes en zonas menos urbanizadas, además de reptiles como lagartijas y serpientes. También pueden observarse aves como halcones, palomas, búhos, correcaminos y diversas aves migratorias. Uno de los cuerpos de agua más importantes del municipio es el Río La Silla, considerado uno de los pocos ríos urbanos de México que mantiene flujo natural en algunos tramos. Este río genera ecosistemas ribereños donde crecen sabinos, sauces, carrizos y otra vegetación asociada al agua, proporcionando refugio para aves acuáticas, anfibios e insectos.